尊龙凯时为您提供人恶性黑色素瘤细胞SK-MEL-2的详细培养说明。本细胞系广泛应用于肿瘤生物学研究，以下是其培养的基本信息和操作指南。

一、细胞培养条件

细胞名称：人恶性黑色素瘤细胞SK-MEL-2

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% 双抗

传代方法：首次建议1:2的比例传代

备注：建议使用无菌离心管收集培养基并留作对比培养。如果对比效果不佳，推荐购买我们的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，待其状态良好时，灌满完全培养液并封好瓶口是最佳运输方式。首先使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后放入超净台内进行无菌操作。将细胞瓶置于37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，随后进行后续处理。用显微镜观察细胞生长情况，并拍照保存不同倍数（推荐40x, 100x, 200x各一张）。前三天的照片为重要售后依据，如果未提供照片，则默认细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

当密度未超过80%时，将完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基置于37℃、5% CO2培养箱培养；当细胞密度超过80%时，进行传代具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱内消化1-2分钟，观察细胞消化情况，若大部分细胞已变圆并脱落，迅速添加5ml以上完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，再将悬液转移至15ml离心管中，以1000RPM离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬细胞。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 细胞覆盖培养瓶80%时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，待细胞收缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃上清，加入1ml的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管。
4. 将冻存细胞放入-80℃冰箱。如果后期转入液氮罐，需在-80℃冰箱里存放24小时以上再转入液氮罐中。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护设备），快速置于37℃水浴中解冻，直至无明显结晶后用75%酒精擦拭管外壁。
2. 将管内细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2培养箱培养。
4. 第二天，更换新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

一些细胞在运输过程中可能会附着不牢而易脱落，此为正常现象。处理方式如下：将培养液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟，收集上清作对比培养。加入1-2ml胰酶，轻轻吹打，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应，再离心并重悬。之后按1:2比例进行分瓶传代，并补充新的完全培养基后培养。

五、售后条款

1）细胞如出现问题可重发的情况包括：细胞在运输过程中丢失、瓶身破损或培养液严重漏液等，对于细胞污染问题请在收到后48小时内提供实验结果，以便核实后重发；如果细胞复苏后24小时内未存活，需提供真实细胞状态照片进行重发；如存在其它问题，需根据具体情况进行协商处理。

2）以下情况不予重发：客户造成的细胞污染、操作不当导致细胞状态不佳，以及非本库推荐的培养体系造成的细胞状态问题等。

使用尊龙凯时的细胞培养产品，您将获得更加专业和优质的服务。如有任何问题，请随时与我们联系！