尊龙凯时为研究人员提供人急性淋巴母细胞白血病细胞MKN45的培养说明书，以下是有关细胞培养的详细信息。

一、细胞培养条件

细胞名称：人急性淋巴母细胞白血病细胞MKN45

生长特性：悬浮生长

冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：1640培养基（含NaHCO₃ 15g/L）+ 10% FBS + 1% P

传代方法：第一次建议1:2传代。传代后每两天更换培养基。

备注：使用无菌离心管收集培养基，以留作过渡对比培养。如对比培养效果不佳，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，请将其培养至良好状态，并使用完全培养液填满瓶子并封好瓶口，以确保运输后的细胞状态。接收细胞后，请在整个细胞瓶上喷洒75%酒精进行消毒，并在超净台下进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO₂的培养箱中静置3-4小时，使细胞状态稳定后再进行后续操作。观察细胞生长情况，并对不同倍数的细胞进行拍照保存（建议40x、100x、200x各一张），前三天的照片是重要的售后依据，不提供照片则默认收到状态良好。传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基，以便进行对比培养。换液后，请将瓶盖稍微拧松。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代：

如果细胞未超过80%汇合度，应将培养瓶中的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，并放入37℃、5% CO₂孵箱培养。如果细胞密度超过80%，则可以进行传代培养，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，放入37℃培养箱中消化1-2分钟。观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速轻敲培养瓶后加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，然后转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO₂的细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存：

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，观察细胞状态，待细胞收缩变圆后加入5ml完全培养液以终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，然后转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml的尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后放入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，如后期需转移至液氮罐，则需在-80℃冰箱中存放24小时以上后再进行转移。

c、细胞复苏：

1. 从液氮中取出冻存管（请佩戴防护面具），快速置入37℃水浴中解冻，直至冻存管内无结晶后，用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO₂细胞培养箱中培养。
4. 第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

某些细胞可能贴壁不牢，在运输过程中容易脱落，属于正常现象。如细胞脱离较多可将所有培养液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟，收集上清作过渡培养（后期对比培养），沉淀后加入1-2ml胰酶进行消化，之后重复培养步骤进行分瓶传代。

五、售后条款

有关细胞出现问题时的重发情况及判定标准如下：

1. 在运输途中出现问题，如细胞丢失、瓶身破损或培养液严重漏液，将予以重发。
2. 如细胞在收到产品48小时内出现污染问题，需提供真实实验结果，核实后予以重发。
3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时大多数未存活，需提供真实细胞状态照片，重发。
4. 处理细胞活性问题，请在收到产品7天内提供真实实验结果，并通过台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后予以重发。

尊龙凯时致力于提供高质量的细胞培养服务，确保科学研究的顺利进行。