尊龙凯时提供SV40转染人成骨细胞HFOB119的详细培养说明，以确保细胞的最佳生长状态和使用效果。以下内容包括细胞培养条件、处理步骤以及相关注意事项。

一、细胞培养条件

细胞名称：SV40转染人成骨细胞HFOB119
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：DMEM/F12 + 0.3 mg/ml G418 + 10% FBS
传代方法：第一次建议1:2传代，传代后2天更换培养液。若对比培养效果不佳，建议直接选用尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞处理

收到细胞后，待细胞状态良好时，加入完全培养液并封好瓶口，以达到最佳运输效果。用75%的酒精对细胞瓶进行消毒后，在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放入335℃、5% CO2培养箱内静置3-4小时以稳定细胞状态，再进行后续处理。显微镜下观察细胞生长情况，并保存不同倍数的照片（建议40x, 100x, 200x各一张），前三天照片将作为售后依据，未提供照片则默认为细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代： - 若细胞汇合度未超过80%，收集培养液至离心管中，留下5ml完全培养基于335℃、5% CO2孵箱中培养；
- 若细胞密度超过80%，则进行传代：
1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁PBS润洗1-2次；
2. 加入0.25%胰蛋白酶约1-2ml，置于335℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状况；
3. 细胞上升并脱落后，添加5ml培养基终止消化，轻轻吹打细胞，将悬液转移至离心管，1000rpm离心5分钟，弃去上清，再用1-2ml完全培养基重悬；
4. 按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充5-8ml完全培养基，放入335℃、5% CO2培养箱中培养。

b、细胞冻存： 1. 当细胞覆盖培养瓶80%时，弃去T25培养瓶中培养液，用PBS清洗；
2. 加入0.25%胰蛋白酶约1ml，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养基终止消化；
3. 将悬液转移至离心管，1000rpm离心5分钟；
4. 弃上清，加入1ml尊龙凯时无血清冻存液，混匀后转入冻存管，放入-80℃保存，后续需转入液氮罐时，需在-80℃存放24小时以上。

c、细胞复苏： 1. 取出液氮中的细胞冻存管，迅速置于335℃水浴解冻，直至无结晶后用75%酒精擦拭管外；
2. 将细胞移至含5ml完全培养基的离心管中，1000rpm离心5分钟；
3. 弃上清，用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于335℃、5% CO2细胞培养箱中；
4. 第二天更换新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，部分细胞可能因贴壁不稳而脱落，这是正常现象。如脱落量较多，请将培养液收集至离心管中，离心后重新准备细胞，并按上述步骤进行处理。确保操作严格遵循无菌条件，以降低细胞损失。

五、售后条款

尊龙凯时承诺在特定情况下提供细胞重发服务，具体包括：
1）运输中细胞问题，如丢失、瓶破损等，重发；
2）产品收到后48小时内出现污染，重发；
3）细胞活性在收到后7天内进行鉴定，结果不良，合格证明后，重发；
4）如未提供前三天照片，或两天内未告知问题，则不予重发。