细胞培养与传代技术指南

在生物医疗领域，细胞培养是基础研究和应用的重要环节。本文将详细介绍细胞培养的条件、传代方法以及相关注意事项，帮助您有效地进行细胞培养操作。

培养条件

尊龙凯时建议在气相中保持95%空气和5%二氧化碳的比例，最佳培养温度为37℃。使用的培养基为MEM，加10%的FBS（胎牛血清）和1%的P/S（青霉素/链霉素）。

细胞传代方法

细胞的传代建议采用1:2的比例传代。每隔两天更换培养液，以保持细胞处于良好的生长状态。

细胞处理步骤

收到细胞后，务必用75%的酒精对细胞瓶进行消毒，然后在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态。在显微镜下观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片（推荐40x、100x、200x各一张），前三天的照片对售后服务至关重要，未提交照片将默认细胞状态良好。

细胞传代步骤

贴壁细胞

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 加入0.25%的胰蛋白酶消化液约1-2ml，放入37℃培养箱消化1-2分钟，查看细胞状态并轻轻吹打，终止消化后，将细胞悬液移至15ml离心管中。
3. 离心1000rpm 5分钟后，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新鲜培养基至5-8ml/瓶，置于37℃、5% CO2的细胞培养箱内继续培养。

悬浮细胞

1. 半换液法：在培养箱中静置1小时，轻吸去培养基3ml，补充3ml完全培养基。
2. 分瓶时，收集细胞悬液于离心管中，1000rpm离心5分钟，弃去上清后加入1-2ml培养基重悬，分瓶传代。

细胞冻存与复苏

细胞生长至瓶内80%覆盖时，清洗细胞并用胰蛋白酶消化。消化后，沉淀细胞并加入冷冻保护液，混匀后放入冻存管中。冷冻细胞时，直接放入-80℃冰箱24小时后再转入液氮罐。

注意事项

在细胞运输过程中，细胞脱落是常见情况。若脱落过多，可将培养液移至离心管，弃去上清液，重悬细胞，再按上述步骤传代。此外，每次传代应确保培养基的质量，以保证细胞的生长活力。

通过这些措施和操作，您可以有效地管理细胞培养过程，确保实验结果的准确性和可重复性。选择尊龙凯时，让您的生物医学研究更具保障。