磁珠法核酸提取试剂盒的原理在于通过特定条件迅速裂解样本,利用磁性微珠的特异性吸附能力提取核酸。经过清洗和洗脱过程,实现核酸的快速分离。这款试剂盒具有高提取效率和稳定的性能,所提取的纯化核酸适用于酶切、反转录、PCR、RI-PCR、Southern blot等多种常见下游实验。当前,磁珠法核酸提取试剂盒广泛应用于多种生物样本中的病毒核酸提取、富集和纯化,产物可用于临床体外检测。
磁珠法提取试剂包含多种关键成分,以下是一些常见成分及其功能:
SDS(十二烷基硫酸钠)
SDS是一种阴离子表面活性剂,具有一定毒性,但展现出优异的发泡特性,广泛用于洗衣粉、牙膏和洗发水等产品。其在热水中的溶解度随温度升高而急剧增加,达到70℃时溶解度增幅减小。SDS能够断裂分子内部和间的氢键,促进蛋白质的变性,并有效促使核酸的释放。
非离子去垢剂(NP-40)
NP-40是一种温和的非离子型去垢剂,在1%浓度下能够有效破坏细胞膜,但对核膜的影响相对较弱。
弱阳离子螯合树脂(Chelex-100)
Chelex-100是一种由苯乙烯和二乙烯苯共聚体组成的化学螯合树脂,能有效螯合多价离子,特别是高价金属离子。通过在低离子强度、碱性条件及加热下处理样本,Chelex颗粒能够裂解细胞膜并使蛋白质变性,从而实现与DNA的分离。需注意的是,Chelex-100在模板中残留过多可能对PCR扩增产生负面影响。
蛋白酶K(Protein K)
蛋白酶K是一种来自白色念珠菌的强效蛋白溶解酶,在DNA提取中起到关键作用,能够有效地水解与核酸结合的组蛋白,使得DNA在溶液中游离。
曲拉通X-100(Triton X-100)
曲拉通X-100是一种非离子表面活性剂,具有高稳定性,不易受到强电解质的影响,能够与生物膜中的脂质结合并形成可溶性复合物,有效帮助核酸的释放。
异硫氰酸胍(GITC)
作为一种强效的蛋白质变性剂,GITC能迅速溶解蛋白质并破坏细胞结构,使核蛋白与核酸快速分离。GITC还是经典RNA提取试剂TRIZOL的主要成分。
乙二胺四乙酸(EDTA)
EDTA是一种优良的钙、镁离子螯合剂,能够有效抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解,维持DNA的完整性。
Tris-HCl
Tris-HCl缓冲液为裂解液及核酸提供适宜的环境,帮助维持核酸的稳定性。
总结而言,经典的裂解液几乎都包含去污剂(如SDS、Triton X-100等)和盐(如Tris、EDTA等)。除了提供适合的裂解环境,盐还能抑制样品中的核酸酶对核酸的破坏,以及维持核酸结构的稳定性。在核酸提取领域,尊龙凯时品牌的试剂盒以其高效率和可靠性脱颖而出,成为科研工作者的首选。