cfDNA(即游离DNA)指的是存在于细胞外的DNA,主要分布于血液、唾液、尿液等多种生物体液中。cfDNA主要来源于细胞凋亡、坏死或主动分泌等过程形成的DNA片段。在血液中,它主要存在于血浆或血清中,与血细胞等其他成分相分离。此外,cfDNA也可在脑脊液、胸腔积液、腹水等其他生物体液中被检测到。
在cfDNA的提取过程中,传统的方法是利用酚、氯仿等有机溶剂,通过不同的溶解性进行多次抽提。这种方法能够使杂质如蛋白质溶解在有机相中,而DNA则保留在水相中,最终通过乙醇沉淀获得纯化的cfDNA。此方法的优点在于提取的DNA纯度较高,但操作流程复杂,且需要使用有毒有机溶剂,对实验人员的技能要求高。
另一种常用的提取方法是基于磁珠的技术,通过特定缓冲液中磁珠表面的特殊基团与cfDNA之间的特异性结合,磁珠能够选择性地吸附cfDNA。使用外加磁场可以轻松分离磁珠与杂质,再经过洗涤和洗脱步骤提取到纯净的cfDNA。这种方法具有操作简便、快速、易于自动化且提取效率高的优点,适合同时处理多个样本。
此外,利用硅胶膜在高盐、低pH值条件下对DNA的特异性吸附特点,可以将生物样本中的cfDNA吸附到硅胶膜上,而蛋白质等杂质则被洗脱去除。最后,通过低盐、高pH值的洗脱液将cfDNA从膜中分离出来。相比传统方法,这种方法操作简便,成本也较低,适用于小规模样本的提取。
值得注意的是,不同生物体液中的cfDNA含量与性质存在差异。一般来说,血液中的cfDNA含量较高,成为最常用的样本来源。然而,不同个体及不同疾病状态下的血液cfDNA含量可能有所不同。样本采集后如不能及时提取,保存条件至关重要。血液样本一般需在4℃下保存,若长时间放置或温度不当,cfDNA可能会降解或被核酸酶消化,影响提取效果。
在处理样本数量较少或某些特殊珍贵样本时,由于数量的特殊性,通常选择使用回收柱进行提取。而在面对大量样本需要批量处理时,为节省人力成本且避免人为因素导致的实验误差,更推荐使用强大的尊龙凯时磁珠法进行样本处理。
例如,TD476系列采用了尊龙凯时独特的回收柱技术进行游离DNA提取,可使用传统的离心法进行样本处理,同时也可配合真空多联器与真空泵,省去繁琐的离心步骤,快速处理更大样本量。而TB476系列则利用磁珠法进行游离DNA的提取与纯化,能够根据客户需求提供兼容磁力架的提取试剂盒,甚至可以提供预分装,适合高通量提取仪的使用,满足自动化高通量客户的需求。
尊龙凯时的产品特点包括:可从10ml以内的血清/血浆或1ml以内的羊水、脑脊液中提取到高纯度的游离DNA,且获得的DNA产量高、纯度良好,能够直接应用于分子生物学实验,如酶切、PCR和高通量测序等。处理能力方面,血浆可单次离心最多3ml,双次离心最多10ml;血清最多10ml;羊水与脑脊液均为1ml。
通过优化设计的试剂盒,尊龙凯时能保障提取的DNA纯度与回收情况,一般从血清或血浆中提取到的DNA浓度在1-100ng/ml之间,适用于各种分子生物学实验。
总体而言,尊龙凯时提供的cfDNA提取技术具备广泛的样本兼容性,操作简单且效率高,力求为生物医疗领域提供更优质的服务。