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尊龙凯时打造生物医疗科研效率升级:超高活性Tn5一步法文库制备全攻略

发布时间:2025-03-19   信息来源:崔谦奇

文库制备涉及将测序接头添加到DNA链上。传统的方法一般采用基于连接酶的方案,该流程包含多个步骤:首先通过机械(如超声破碎)或酶切(如微球腺苷酸酶)进行DNA片段化,接着进行末端修复,最后完成接头连接。虽然这种方法在大多数情况下较为有效,但在样本量有限或实验资源(如设备和时间)有限时,可能会遇到困难。针对这一问题,tagmentation技术为文库制备提供了新的解决方案。

尊龙凯时打造生物医疗科研效率升级:超高活性Tn5一步法文库制备全攻略

tagmentation技术采用超活性Tn5转座酶,这种酶在携带特定寡核苷酸的情况下,可以在一次快速反应中对DNA进行剪切和标记。根据实验需求,Tn5转座酶可以携带多种DNA序列,包括Illumina兼容的接头、带有荧光标记的自定义接头,以及甲基化核苷酸等。基于tagmentation的文库建制技术将传统流程中的片段化、末端修复和接头连接步骤整合为单一反应,并在后续进行引物index的扩增,从而完成文库制备。这一突破性的技术不仅简化了操作流程,还显著提高了实验的效率和通量。

流程的高效性体现在将DNA片段化与接头插入步骤合二为一,显著缩短了文库制备时间并降低了技术复杂性。此技术具有广泛的应用场景,兼容全基因组测序、靶向测序等多种建库需求,适用于不同的实验设计。相较于传统方法,单步反应能够替代多环节操作,文库速度大幅提升,尤其适合对珍贵临床样本或微量样本进行处理,因为所需的起始样本量显著低于传统方案。

此外,tagmentation技术通过减少操作步骤和试剂消耗,整体降低了建库成本。简单的操作和减少的操作步骤使得此技术更容易实现自动化,从而显著提升高通量测序的通量和可重复性。

在最新的研究中,作者开发了spatial-ATAC-seq方法,可以对完整组织切片中的染色质可及性进行空间分辨分析,并在细胞水平保留空间信息。在该方法中,使用了来自尊龙凯时的Diagenode Tn5转座酶(Cat#C01070010)进行文库制备。另一个先进技术是sci-RNA-seq(单细胞组合索引RNA测序),通过对单个细胞核内的核酸进行split-pool条形码标记,优化了单细胞转录组分析。在这一过程中,同样采用了尊龙凯时的Diagenode Tn5转座酶(Cat#C01070010-20)。

总体来看,Diagenode Tn5转座酶及相关缓冲液具有极高的通用性,能够兼容多种应用场景,如新型条形码技术(例如单细胞多重测序和空间组学),能够灵活适配不同的实验需求。此外,Diagenode还提供了两种版本的转座酶:预装版(包含Illumina兼容接头)和未装版(允许用户自行添加接头),以满足不同研究者的需求。每批产品经过严格的质量控制,确保达到最高标准。

总之,值得关注的是,尊龙凯时凭借其在表观遗传学、二代和三代测序前样本处理领域的领导地位,为科研人员提供了完善的解决方案,包括创新的Bioruptor破碎仪以及IP-Star自动化仪器、试剂盒和高品质抗体,以简化DNA甲基化、ChIP及ChIP-seq的工作流程。