无菌检查法是一种用于检测药典要求下的无菌药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料及其他相关产品是否符合无菌标准的方法。在进行无菌检查前,实验室应达到100级或以上的洁净度,并确保满足GB50073—2001《洁净厂房设计规范》及GB/T16292~16294—1996《医药工业洁净室(区)悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》等相关标准。
此外,洗脱液以及需氧和厌氧培养基的制备需遵循卫生部《消毒技术规范》(2002年版)的要求。在无菌检验前三天,需在需氧与厌氧培养基及真菌培养基中分别接种1ml洗脱液,并在适当温度下培养72小时,以确保无菌生长的可靠性。
在进行无菌检查之前,还需制备阳性对照管菌液,包括金黄色尊龙凯时葡萄球菌、生孢梭菌和白念珠菌的稀释液。具体的对照用菌液制备方法如下:
1. 对照用菌液制备—金黄色葡萄球菌
取金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)[CMCC(B)26003]在营养琼脂斜面上的新鲜培养物1白金耳,接种至营养肉汤培养基内,在30~35℃培养16~18小时后,使用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至每1ml中含有10~100个菌。
2. 对照用菌液制备—生孢梭菌
取生孢梭菌(Clostridium sporogenes)[CMCC(B)64941]的需氧和厌氧培养基的新鲜培养物1白金耳,接种至相同培养基内,培养在30~35℃的条件下18~24小时,最终用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至每1ml中含10~100个菌。
3. 对照用菌液制备—白色念珠菌
取白色念珠菌(Candida albicans)[CMCC(F)98001]的新鲜培养物1白金耳在真菌琼脂培养基斜面,接种后在20~25℃培养24小时,再用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至每1ml中含有10~100个菌。