### 人前列腺癌细胞VCAP培养指南

#### 一、细胞培养条件

VCAP细胞的培养应在适宜的环境中进行，确保细胞健康生长。环境设置为37℃、5% CO₂的培养箱中。

#### 二、细胞处理步骤

当细胞收到后，首先要用75%的酒精喷洒整个细胞瓶，以进行消毒。然后，将细胞置于超净台内，严格执行无菌操作，将细胞瓶在培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态。

在显微镜下观察细胞生长情况，并在不同倍数下拍照保存，建议拍摄40x、100x及200x的照片作为售后依据。若三天内未提供照片则默认细胞状态良好。

对于传代培养，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自己制备的完全培养基以便进行比较。在换液时，将瓶盖适度拧松。

#### 三、细胞培养步骤

##### a、细胞传代：

在细胞密度未超过80%时，收集培养液至离心管中，保留5ml完全培养基再放入培养箱。如果细胞密度超过80%，可进行传代：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁的PBS清洗细胞1-2次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，在37℃培养箱中消化1-2分钟。观察细胞状态，若细胞开始变圆并脱落，迅速轻敲培养瓶并加入5ml以上完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落并吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，以1000RPM离心5分钟，弃去上清液，并补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO₂的培养箱中。

##### b、细胞冻存：

1. 当细胞覆盖培养瓶表面积达到80%时，弃去培养液并用PBS清洗细胞。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞变圆后，加入5ml完全培养基以终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，随后转移悬液至15ml离心管中，1000rpm离心5min。
3. 弃去上清，加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后放入冻存管中。
4. 冻存细胞应直接放入-80℃冰箱，若后期需转入液氮罐，需在-80℃存放超过24小时后再转入。

##### c、细胞复苏：

1. 将冻存管从液氮中取出（注意佩戴防护面具），迅速置入37℃水浴中解冻，至无结晶后，用75%酒精消毒冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，加入5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO₂细胞培养箱中。
4. 第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

#### 四、注意事项

在运输过程中，某些细胞可能会因贴合不牢而脱落，这是一种正常现象。如遇细胞脱落过多，可进行离心处理，并在恢复细胞活性的过程中注意操作细节。

#### 五、售后条款

1）细胞出现问题时的重发情况及判定标准：

1. 细胞在运输过程中出现问题，如丢失、瓶身破损等，需重发。
2. 如收到后48小时内出现细胞污染问题，请提供实验结果以核实，重发。
3. 常温下发货的细胞静置后若存活率不足，应提供照片进行重发处理。
4. 细胞活性问题需在收到7天内反馈，并提供活力测定的结果。

2）细胞出现问题时不予重发的情况：

1. 因客户原因造成的细胞污染。
2. 客户操作不当导致的细胞状态不良。
3. 使用非推荐培养体系导致的细胞状态不佳。

通过科学合理的操作，借助尊龙凯时优质的细胞产品，您将能获得更好的实验结果。